菌种筛选实验方案

黑曲霉 米曲霉 康宁木霉

产朊假丝酵母 热带假丝酵母 啤酒酵母 二 实验所用到的试剂

盐酸 氢氧化钠 浓硫酸 硫酸铜 硫酸镁 磷酸二氢钠 硫酸镁 氯化钠 3,5--二硝基水杨酸 三 实验设备

电子天平 培养箱 水浴锅 分光光度计 PH计 电热恒温干燥箱 凯氏定氮仪 四 试验方法

还原糖测定 DNS显色法 蛋白含量测定 凯氏定氮法 PH值 PH计 五 菌种培养基配制

1、霉菌 平板培养

以20g土豆+100ml水，定容，（+2g葡萄糖+2g琼脂）配制培养基；

2、酵母 液体培养

以20g土豆+100ml水，定容，（+2g葡萄糖）配制培养基；

3、发酵培养基配制

（1）麦冬：

药渣10g, 硫酸铵0.6g 磷酸氢二钾 0.02g 磷酸二氢钾 0.025g 硫酸镁 0.005g 氯化钠0.005g, ，固液比1:3（含水量75%）

（2）三七：

药渣10g, 硫酸铵0.4g 磷酸氢二钾 0.02g 磷酸二氢钾 0.025g 硫酸镁 0.005g 氯化钠0.005g, ，固液比2:3（含水量60%）

六 灭菌

制备好的培养基立即于121摄氏度下灭菌30min. 七 培养条件

将孢子液/种子液按一定比例接入固体培养基，30摄氏度在恒温培养箱中培养； 八：菌种筛选 （一）单菌筛选 1、麦冬药渣

分别接入各种菌，每12个小时取一次样，取14个点（7天），每个点三个平行样，通过测定还原糖、粗蛋白、真蛋白含量得到其生长代谢趋势线，根据结果进行最优菌种筛选。

2、三七药渣

分别接入各种菌，每12个小时取一次样，取14个点（5天），每个点三个平行样，通过

测定还原糖、粗蛋白、真蛋白含量得到其生长代谢趋势线，根据结果进行最优菌种筛选。 （二）混菌发酵

三种霉菌、三种酵母共九种组合 九、对照实验：

参照上述实验步骤和内容，在药渣中只加入水调节合适的水含量，不添加任何其它营养盐的情况下进行对照实验，发酵样品烘干保存，必要时再进行产物成分分析（可先不分析样品）。

特别提醒：

1、所有实验应该同时进行，节约时间。

2、药渣及营养盐的添加要称量准确，减少误差。