关于呼吸道合胞病毒及其检测的相关研究进展

摘要】呼吸道合胞病毒是引起婴幼儿呼吸道感染最常见的病毒病原体，患儿经常会表现出咳嗽、鼻塞，较重者可出现呼吸困难等症状。本文从该病毒的分子生物学特征、流行病学特点、临床表现、预防和治疗、临床检测方法这些方面进行讨论，以便掌握该病毒的特点。。

【关键词】呼吸道合胞病毒；检测方法；呼吸道感染

呼吸道合胞病毒（Respiratory syncytial virus, RSV））是一种单负链RNA病毒，属肺炎病毒属。RSV是呼吸道感染患儿的最常见的病毒病原体［1］。。患儿经常会表现出咳嗽、鼻塞，较重者可出现呼吸困难等症状。目前临床上常用的检测方法有病毒免疫荧光技术法、细胞分离培养法、碱性磷酸酶、抗碱性磷酸酶桥联酶标法、酶联免疫检测法、聚合酶链反应等［2］。 1 分子生物学特点

呼吸道合胞病毒颗粒与副流感病毒相似，都是RNA病毒［3］。对物理化学因素抵抗力较低，不耐热，冰冻融化容易灭活。在细胞培养中,在胞浆内繁殖,可形成特有的合胞体,具有特异性［4］。 2 流行病学特点

合胞病毒是呼吸道感染常见的病原体，感染极广，其感染途径主要为呼吸道传播,RSV 在环境中的可以存活时间约6 h多。经流行病学调查，RSV流行有显著的气候及季节特征，在温带及亚热带地区，感染发生在秋末、冬季或初春季；在热带则发生在雨季。在我们国家，RSV流行的常见季节发生在北方的冬春季节和南方的夏秋季。RSV引起的肺炎主要见于一岁以内的婴儿，其中2月龄婴儿发病率较高［5］。

3 临床表现特征

该病毒感染多见于婴幼儿。初期可见咳嗽、鼻堵塞。多数病例的热程为4～10天。患儿经常会表现出咳嗽、鼻塞，较重者可出现呼吸困难等症状［6］。Nakamura等发现患有神经肌肉疾病患儿更易受RSV感染，表现出意识模糊、抽搐等急性RSV脑病症状，以及出现较严重的神经系统后遗症，经CT和磁共振成像扫描显

示弥漫性脑损伤。 4 预防与治疗

RSV主要经空气或直接接触传播，要保持个人及环境卫生，勤洗手，妥善处理口鼻排出的分泌物，婴幼儿或抵抗力弱的人应注意防护，避免和患者接触，以防感染。因本病较轻，不需用较多的对症疗法及支持疗法。对临床表现较重的患者可用三氮唑核苷雾化吸入治疗，也可用短期大剂量雾化治疗合胞病毒感染，效果较好有效。

5 临床与实验室检测方法

临床上常用检测方法有时在无法明确病原体，常出现滥用抗生素、延误病情等问题。目前主要采用以下方法检测 5.1 病毒分离培养法

该技术原理是将待测标本接种于培养细胞上，是诊断病毒性疾病的金标准。培养病毒一般使用细胞，可用实验动物、鸡胚做病毒的培养。因RSV不耐热和冻融，细胞培养条件苛刻，成本和技术要求较高，且不易储存及运输，因此该方法主要用于实验室检测，而临床应用较局限。

5.2 免疫荧光技术

免疫荧光技术是利用抗原与抗体特异性结合原理及特殊的荧光素标记技术，通过激光激发使荧光素发出荧光，在荧光显微镜观察荧光的变化，对细胞内的抗原进行分析的技术。RSV检测物主要检测呼吸道分泌物，采用的是荧光抗体检测样本中的抗原。

细胞或组织中形成的抗原抗体复合物上含有荧光素，利用观察标本，荧光素受激发光的照射而发出明亮的荧光，可以看见荧光所在的细胞或组织，从而确定抗原或抗体的性质、定位，以及利用定量技术测定含量。免疫荧光技术有些常见问题，背景过高，信号弱或无信号荧光，荧光强度会随时间的延长而逐渐消退，且必须用荧光显微镜检测，技术要求高，结果不易长期保存，由于这些缺点，在临床普及上受到一定的限制。

5.3 碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶桥联酶标法

碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶(APAAP)桥联酶标法是以APAAP复合物及桥联二，抗替代了一般间接免疫酶技术中的酶标抗体。由于呼吸道组织细胞中几乎不存在碱性磷酸酶，因而比价适用于呼吸道鼻咽分泌物脱落细胞中RSV抗原。APAAP桥联酶标技术中使用的第一抗体RSV-McAb，具有高度的特异性，不需要荧光显微镜，操作简单，可用于快速诊断RSV感染，有利于在推广。 5.4 ELISA法

酶联免疫检测(ELISA)可用于检测大分子抗原和特异性抗体等，具有快速、灵敏、简便、载体易于标准化等优点。对呼吸道感染患者做RSV-IgA、RSV-IgG定量RSV-Ag定性检测，对检测结果进行分析。可在很大程度上降低假阳性问题。结果可靠，特异性强，可做为临床快速诊断合胞病毒的主要方法。 5.5聚合酶链反应（PCR）法

常用检测RSV方法较敏感的是巢式PCR，是一种变异的聚合酶链反应,使用两对PCR引物扩增完整的片段,该技术需做两次PCR，操作较繁琐，结果易出现假阳性。张其威等将定量检测RSV技术和巢式PCR相结合,通过对呼吸道感染者的鼻腔分泌物,检测RSV序列,可以明确RSV的感染。该方法可以快速诊断RSV的感染，指导医生针对性用药。 5.6 检测方法的比较

在临床应用中,检测RSV的方法，各有优缺点,病毒分离培养条件苛刻,要求高,不适合RSV感染的早期诊断。免疫荧光技术易出现假阳性,且不易长期保存.在普及中受到影响。 APAA桥联酶标法、ELISA法、巢式PCR等方法结果可靠，操作简单，可广泛应用于RSV检测，有利于在临床上推广。 参考文献

［1］Belino － Studzińska P，Pancer K． Respiratory syncytial virus: as

anetiological agent of respiratory tract infection in children and adults ［J］． Przegl Epidemio，2008，62( 4) ∶ 767 －775．

[2] 刘崇海, 杨锡强, 魏钰书. 呼吸道合胞病毒病原学检测技术的研究进展[J]. 国际儿科学杂志, 2006, 33(1): 11-14.

［3］金奇.分子病毒学［Ｍ］,北京：科学出版社，2001：461-479．

[4] 孔晓慧, 寿好长, 刘春艳. 呼吸道合胞病毒的分型研究[J].中华实验和临床病毒学杂志, 2000, 03: 75-78.

[5] 孙朋. 小儿呼吸道合胞病毒感染调查分析[J]. 中国社区医师, 2006, 8(151): 49.

[6] 宫道华, 吴升华. 小儿感染病学[M]. 人民卫生出版社,2002: 420-425.

项目名称：2016年安徽省高校自然科学研究项目；项目编号：kj2016A248